【名稱(chēng)】

豬瘟病毒阻斷ELISA抗體檢測試劑盒使用操作說(shuō)明書(shū)

【作用與用途】

豬瘟病毒阻斷ELISA抗體檢測試劑盒（Blocking ELISA Kit For Classical Swine Fever Virus Antibody test）用于檢測豬血清中的CSFV特異性抗體，評估養豬場(chǎng)CSFV疫苗免疫狀況以及感染豬的血清學(xué)輔助診斷。

【檢測原理】

本試劑盒采用阻斷ELISA法，在酶標板條微孔上預包被豬瘟病毒抗原。在實(shí)驗中，加入樣品稀釋液和待檢血清，經(jīng)過(guò)溫育后，若樣品中含有CSFV特異性抗體，則與包被板上抗原結合。經(jīng)洗滌后除去未結合的抗體和其他成分后，再加入酶標抗體，樣本中的抗體阻斷了酶標抗體與包被板上的抗原結合。再經(jīng)洗滌除去未結合的酶結合物，在微孔板中加入底物液，經(jīng)酶催化形成藍色產(chǎn)物，加入終止液終止反應后，用酶標儀450 nm波長(cháng)測定反應孔中的吸光度OD值。

【主要成分與含量】

【需自備的材料】 去離子水、微量移液器、酶標儀（450 nm）、計時(shí)器、離心機（4000 rpm）等。

【用法與判定】

1、用法

1.1 試劑配制

洗滌工作液：使用前，濃縮的洗滌液應恢復至室溫（20～25℃），并搖動(dòng)，使沉淀溶解（最好在 37℃恒溫培養箱中加熱 5～10 min），然后用蒸餾水作 10 倍稀釋?zhuān)ɡ纾?5mL 的濃縮洗滌液加上675mL 蒸餾水）混勻，稀釋好的洗滌液 2～8℃可存放 7 日。

1.2 樣本處理

取動(dòng)物全血，待血液凝固后，4000 rpm 離心 10 min，收集上清。也可以自然凝固析出血清，無(wú)溶血。注：陰、陽(yáng)性對照不用稀釋。

1.3 操作步驟

① 取抗原包被板（根據樣品多少，可拆開(kāi)分次使用），設陰、陽(yáng)性對照各 2 孔，取陰性、陽(yáng)性對照各 100 µL 分別加入反應孔中。其他孔加入樣品稀釋液 50 µL/孔，然后加入待檢血清 50 µL/孔。輕輕振勻孔中樣品，蓋上蓋板膜，37℃避光反應 30 min。 ② 棄去孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液 300 µL，靜置1min 后，棄去洗滌液。洗滌 4 次后在吸水紙上拍干。

③ 配制酶標抗體工作液:按體積比 1:100（1 份酶標抗體濃縮液+99 份酶標抗體稀釋液）混勻備用。

④ 每孔加酶標抗體工作液 100 µL，蓋上蓋板膜，37℃避光反應30 min。 ⑤ 棄去孔中的溶液，洗滌 4 次，方法同②。

⑥ 將底物 A 液與底物 B 液按 1:1 混合，加入孔中，100 µL/孔，蓋上蓋板膜，37℃避光反應 10 min。 ⑦ 每孔加入終止液 50 µL，5 min 內測定結果。

2、判定

在酶標儀上讀各孔 OD450nm 值。

① 試驗成立的條件：

陰性對照平均 OD450nm 值≥1.0 且陽(yáng)性對照 P（阻斷率）≥ I 50%，試驗結果才有效；否則，應進(jìn)行重復試驗。

② 計算方法：

PI（阻斷率）=100%-(樣品 OD 值÷陰性 OD 均值)×100%

③ 陰陽(yáng)性判斷：

PI≥40%時(shí)，判為陽(yáng)性；PI＜40%時(shí)，判為陰性。

【注意事項】

1、試劑盒使用前各試劑應平衡至室溫。使用后放回 2~8℃保存。

2、不同批號的試劑盒組份不得混用，不同試劑使用時(shí)應防止交叉污染。

3、底物液和終止液不能暴露于強光或接觸氧化劑。

4、稀釋 10×濃縮洗滌液時(shí)，如發(fā)現有結晶，應加熱使其溶解后再使用。

5、移液時(shí)，應盡量準確，防止產(chǎn)生氣泡。

6、應嚴格遵守各操作步驟規定的時(shí)間和溫度。

【貯藏與有效期】2～8℃避光保存，有效期為 12 個(gè)月。

【規格】96 孔/盒；192 孔/盒

【生產(chǎn)企業(yè)】

北京中海生物科技有限公司

中海生物技術(shù)（棗莊）有限公司

網(wǎng)址：m.91anmoyi.cn

僅供獸醫診斷使用

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